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中藥丸劑DNA提取的完整步驟

                             

 藥丸劑是藥材細粉或藥材提取物加適宜粘合劑或輔料,制成的球形或類球形的固體制劑,是中成藥古老的劑型之一。PCR的DNA檢測方案正在成為中藥材真?zhèn)舞b定的金標(biāo)準(zhǔn),但是加工后的中藥丸由于成分復(fù)雜,包括粘合劑和輔料對PCR反應(yīng)有抑制作用,導(dǎo)致DNA檢測方法不能有效應(yīng)用于這個領(lǐng)域。本試劑盒通過自主開發(fā)的DNA提取方法,對一些PCR抑制成分進行有效的清洗,從而達到有效的DNA提取純度。提取的DNA可直接用于PCR反應(yīng),為藥材的真?zhèn)舞b定和摻假檢測提供了一個可靠的檢測方案。

 

?雜質(zhì)清洗前處理?:

將丸劑溶解于我司開發(fā)的清洗劑A,讓中藥丸在65C的高溫下充分溶解于清洗劑,特別讓膠狀物質(zhì)也可以溶解。隨后再進一步采用清洗劑B去溶解蛋白質(zhì)、皂甙和油脂等雜質(zhì),讓純凈的動植物組織可通過高速離心得以有效分離。

 

組織裂解:

將離心所得的沉淀組織通過裂解液進行核酸釋放,同時需要考慮有效去除多糖和苯酚類雜質(zhì)。同時裂解試劑應(yīng)避免使用苯、氯仿等有害有機溶劑的核酸提取方法。

 

磁珠法提取核酸:

磁珠法核酸提取是近期發(fā)展迅速的一種新型核酸提取方法。磁珠能在微觀界面上與核酸分子特異性地識別和高效結(jié)合。利用氧化硅納米微球的超順磁性,在離液鹽(鹽酸胍、異硫氰酸胍等)和外加磁場的作用下,能從血液、動物組織、食品、病原微生物等樣本中分離出核酸。磁珠法核酸提取不使用傳統(tǒng)方法中的苯、氯仿等有毒試劑,對實驗操作人員的傷害減少到最少,符合現(xiàn)代環(huán)保理念。同時,磁珠法因為摒棄了離心步驟,非常適合實現(xiàn)高通量的自動化核酸提取。

 

洗脫與質(zhì)檢?:

用TE緩沖液或無菌水洗脫DNA,紫外分光光度計檢測A260/A280比值(1.8-2.0為合格)?。電泳觀察條帶完整性,避免拖尾或彌散?。

 

注意事項:

操作全程戴手套,避免DNA酶污染?。

深加工食品應(yīng)加大樣品量到1-5g的提取方案,減少因取樣誤差導(dǎo)致的假陰性結(jié)果。


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