鏈霉親和素包被微孔板是預(yù)先將鏈霉親和素固定在聚苯乙烯微孔板表面的預(yù)制微孔板，廣泛應(yīng)用于生物檢測實驗中，核心利用鏈霉親和素-生物素高親和力結(jié)合的特性，用于固定生物素化的分子探針。
鏈霉親和素對生物素具備親和力，結(jié)合常數(shù)可達到10^-15mol/L，且每分子鏈霉親和素可結(jié)合4個生物素分子，反應(yīng)穩(wěn)定快速，因此可以通過提前包被鏈霉親和素，一步法固定生物素化的抗體、肽段、寡核苷酸等捕獲分子，大幅簡化實驗流程。
實驗前準備：
提前從4℃冰箱取出微孔板，平衡至室溫（約15-30分鐘），未使用的微孔立即放回密封袋，4℃密封儲存，避免受潮。
準備好實驗所需試劑：生物素化捕獲分子（抗體/肽段/核酸探針）、待測樣本、洗滌液（一般為含0.05% Tween-20的PBST緩沖液）、封閉液（可選，若出廠已預(yù)封閉可省略）、檢測標記物（酶標/熒光標記二抗）。
通用操作步驟：
結(jié)合生物素化捕獲分子：將生物素化捕獲分子用合適緩沖液稀釋至工作濃度，每孔加入100μL稀釋后的捕獲分子，室溫孵育30-60分鐘（部分小分子探針可4℃孵育過夜），利用鏈霉親和素-生物素的親和力完成固定。
洗滌去除未結(jié)合分子：孵育結(jié)束后棄去孔內(nèi)液體，每孔用200-300μL洗滌液洗滌3次，每次浸泡30秒，洗去未結(jié)合的游離捕獲分子，拍干孔內(nèi)殘留液體。
封閉（可選）：若出廠未預(yù)封閉，或?qū)嶒瀸档头翘禺愋越Y(jié)合要求較高，每孔加入200μL 1-5% BSA封閉液，室溫封閉1-2小時，隨后洗滌3次拍干；出廠已預(yù)封閉的產(chǎn)品可省略此步。
捕獲待測靶標：加入稀釋好的待測樣本或標準品，每孔100μL，室溫孵育1-2小時（或按照實驗方案調(diào)整時間），讓靶標與固定好的捕獲分子特異性結(jié)合。
洗滌結(jié)合檢測抗體：棄去樣本洗滌3次拍干，加入酶標/熒光標記的檢測抗體，每孔100μL，室溫孵育1小時，再次洗滌3-5次去除未結(jié)合抗體。
信號檢測讀數(shù)：加入對應(yīng)顯色/發(fā)光/熒光底物，按照檢測方法要求孵育后，立即用酶標儀/化學(xué)發(fā)光儀讀取信號值，根據(jù)標準曲線計算樣本中靶標的濃度。
